Иммуноблот на сифилис – относительно новый метод серологического исследования крови. В последние годы получил развитие и активное применение с целью эффективной и надежной диагностики сифилиса.
Иммуноблот — современный высокоточный безопасный диагностический тест, позволяющий с точностью подтвердить или опровергнуть диагноз сифилитической инфекции. С помощью данного метода в плазме крови определяется наличие и уровень антител (Ig М и Ig G), которые иммунная система человека продуцирует в ответ на внедрение инфекции.
Кроме того, анализ отличает высокая чувствительность и специфичность при стертом бессимптомном течении сифилиса. Иммуноблот используется только с диагностической целью и не подходит для контролирования процесса лечения.
Описание метода
Иммуноблот относится к группе так называемых «трепонемных тестов», при выполнении которых используют специфические антигены, характерные только для возбудителя сифилиса – бледной трепонемы. Тогда как «нетрепонемные тесты» могут обнаруживать антитела возбудителя или тканей самого человека и показывать положительный результат при отсутствии инфекции в организме.
В ходе линейного иммуноблоттинга бледную трепонему (выделенную из инактивированных штаммов или при помощи генной инженерии) способом гелевого электрофореза разделяют на специфические растворимые антигены (белки), глико- и липопротеины согласно их молекулярным размерам. Затем разделенные белки (антигены) транспортируют на специальную нитроцеллюлозную мембрану, где происходит обработка точек исследуемой сывороткой крови и иммуноглобулинами.
Если антитела присутствуют в крови больного, на тесте образуются полоски. Учитывая визуально их расположение и интенсивность, судят о результатах.
Критерии оценки анализа
- Отрицательный: для антител класса IgG и IgМ – полос нет;
- Неопределенный: для антител класса IgМ – одна нечеткая полоса, для IgG – четкая;
- Положительный: для антител класса IgМ – одна и более четкая полоса, для IgG – две и более четкие полосы.
Расшифровка результатов
Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании. Последующий положительный анализ на определение IgG, проведенный на 1-1,5 месяца позже, подтверждает данный факт.
Наличие IgM у новорожденных детей указывает на диагноз сифилитической инфекции, так как передача материнских IgM через плаценту во время беременности исключена.
Отрицательный ответ говорит о том, что заражение сифилисом пациента не произошло или же тест был проведен ранее, чем успела отреагировать иммунная система.
В случае неопределенной интерпретации результатов анализ целесообразно повторить через определенное время, или же провести тестирование на наличие IgM к другим белкам бледной трепонемы. Как правило, такое состояние возникает у лиц с перенесенным сифилисом в анамнезе и определяется термином «серорезистентность».
Вероятность развития ложноположительных реакций сравнительно низка.
Преимущество иммуноблота перед остальными тестами состоит прежде всего в том, что реакция «антиген-антитело» зависит от молекулярной массы белка, и не требует участия дорогостоящих технологий. Кроме того, на результат иммунного ответа не влияет определенные свойства субстрата, нестабильность и отсутствие растворимости некоторых антигенов.
В анализе можно выявить реакцию антител с более, чем одним антигеном, что в сложных диагностических ситуациях имеет большую ценность. Также метод прост в исполнении и позволяет определить IgG и IgМ отдельно, если это необходимо.
Иммуноблот показывает высокую эффективность по выявлению иммунного ответа организма, как при получении антибактериальной терапии, так и без нее.
Используемые антигены
Для проведения тестирования применяют 5 основных антигенов:
- 47 кДа мембранный белок (TpN47) – специфичный;
- 45 кДа (TmpA) – специфичный;
- 22 кДа (Р 22) – неспецифичный;
- 17 кДа мембранный белок (TpN17) – специфичный;
- 15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный.
Считается, что выявление антител к протеинам именно с такой молекулярной массой является диагностически значимым для сифилиса.
Один из антигенов Р 22 является неспецифичным для бледной трепонемы, именно поэтому появление полосы на этом белке может обусловить ложноположительный результат обследования.
Состояния, при каких показано обследование методом иммуноблота
- Наличие клинических признаков заболевания;
- Положительные или сомнительные результаты предыдущих серологических исследований, особенно при следующих заболеваниях и состояниях: туберкулез, онкологический процесс, болезнь Лайма, сахарный диабет, вакцинация, наркозависимость, хронический алкоголизм, гиперлипидемия, беременность, возраст старше 70 лет и т.д.
- Подозрение на первичный и вторичный сифилис при отрицательных ответах других тестирований;
- Подозрение на сифилис на фоне приема антибиотиков, других антисептических препаратов;
- Подозрение на скрытый сифилис;
- Все язвенные поражения органов половой системы;
- Половой контакт с больным сифилисом в анамнезе;
- Наличие сопутствующего венерического заболевания;
- Врожденная форма сифилиса;
- Нейросифилис;
- Сифилис внутреннего уха;
- ВИЧ-инфекция;
- Сопутствующие аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, системная склеродермия, сахарный диабет и т.д.)
Сроки определения противотрепонемных антител
Специфические антитела против возбудителя сифилитической инфекции (Ig M) появляются в организме спустя 7-14 дней после инфицирования с максимальным уровнем на 6-9 неделе. Исчезают — через 12-18 месяцев у лиц, не получавших антибактериальную терапию, и через 3-6 месяцев – после проведения полноценного курса лечения. Их можно обнаружить у пациентов, как с первичным, так и с вторичным сифилисом, что позволяет уточнить старая это инфекция или свежая. Однако при стертом течении заболевания IgM не идентифицируются.
Противотрепонемные антитела класса Ig G появляются позже, примерно к концу первого месяца инфекционного заболевания и обычно сохраняются на протяжении долгого времени или всей жизни. Их концентрация постоянно растет и максимально фиксируется через 1-2 года после первой встречи организма с бледной трепонемой.
К моменту появления первых признаков болезни в крови больного можно выявить оба класса антител.
Появление IgM снова в крови больного свидетельствуют о повторном заражении сифилисом, его рецидиве или неэффективной лечебной тактике.
Подготовка к правильной сдаче анализа
Определенной подготовки к проведению теста не требуется. Среди общих рекомендаций – взятие образца крови не ранее чем через 24 часа после употребления алкоголя, воздержание от курения.
