Иммуноблот на сифилис

Иммуноблот на сифилис – относительно новый метод серологического исследования крови. В последние годы получил развитие и активное применение с целью эффективной и надежной диагностики сифилиса.

Иммуноблот

Иммуноблот — современный высокоточный безопасный диагностический тест, позволяющий с точностью подтвердить или опровергнуть диагноз сифилитической инфекции. С помощью данного метода в плазме крови определяется наличие и уровень антител (Ig М и Ig G), которые иммунная система человека продуцирует в ответ на внедрение инфекции.

Кроме того, анализ отличает высокая чувствительность и специфичность при стертом бессимптомном течении сифилиса. Иммуноблот используется только с диагностической целью и не подходит для контролирования процесса лечения.

Описание метода

Иммуноблот относится к группе так называемых «трепонемных тестов», при выполнении которых используют специфические антигены, характерные только для возбудителя сифилиса – бледной трепонемы. Тогда как «нетрепонемные тесты» могут обнаруживать антитела на липоидный антиген возбудителя или тканей самого человека и показывать положительный результат при отсутствии инфекции в организме.

В ходе линейного иммуноблотинга бледную трепонему (выделенную из инактивированных штаммов или при помощи генной инженерии) способом гелевого электрофореза разделяют на специфические растворимые антигены (белки), глико- и липопротеины согласно их молекулярным размерам. Затем разделенные белки (антигены) транспортируют на специальную нитроцеллюлозную мембрану, где происходит обработка точек исследуемой сывороткой крови и иммуноглобулинами.

Если антитела присутствуют в крови больного, на тесте образуются полоски. Учитывая визуально их расположение и интенсивность, судят о результатах.

Критерии оценки анализа

  • Отрицательный: для антител класса IgG и IgМ – полос нет;
  • Неопределенный: для антител класса IgМ – одна нечеткая полоса, для IgG – одна четкая полоса;
  • Положительный: для антител класса IgМ – одна и более четкая полоса, для IgG – две и более четкие полосы.

Расшифровка результатов

Положительный результат свидетельствует о недавнем инфицировании. Последующий положительный анализ на определение IgG, проведенный на 1-1,5 месяца позже, подтверждает данный факт.

Наличие IgM у новорожденных детей указывает на диагноз сифилитической инфекции, так как передача материнских IgM через плаценту во время беременности исключена.

Отрицательный ответ говорит о том, что заражение сифилисом пациента не произошло или же тест был проведен ранее, чем успела отреагировать иммунная система.

Иммуноблот на сифилис

В случае неопределенной интерпретации результатов анализ целесообразно повторить через определенное время (не раньше, чем через 7 дней), или же провести тестирование на наличие IgM к другим белкам бледной трепонемы. Как правило, такое состояние возникает у лиц с перенесенным сифилисом в анамнезе и определяется термином «серорезистентность».

Вероятность развития ложноположительных реакций сравнительно низка.

Преимущество иммуноблота перед остальными тестами состоит прежде всего в том, что иммунная реакция «антиген-антитело» зависит от молекулярной массы белка, и не требует участия дорогостоящих технологий. Кроме того, на результат иммунного ответа не влияет определенные свойства субстрата, нестабильность и отсутствие растворимости некоторых антигенов.

В одном анализе можно выявить реакцию антител с более, чем одним антигеном, что в сложных диагностических ситуациях имеет большую ценность. Также метод прост в исполнении и позволяет определить IgG и IgМ отдельно друг друга, если это необходимо.

Иммуноблот показывает высокую эффективность по выявлению иммунного ответа организма, как при получении антибактериальной терапии, так и без нее.

Используемые антигены

Для проведения тестирования применяют 5 основных антигенов:

  • 47 кДа мембранный белок (TpN47) – специфичный;
  • 45 кДа (TmpA) – специфичный;
  • 22 кДа (Р 22) – неспецифичный;
  • 17 кДа мембранный белок (TpN17) – специфичный;
  • 15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный.

Считается, что выявление антител к протеинам именно с такой молекулярной массой является диагностически значимым для сифилиса.

Один из антигенов Р 22 является неспецифичным для бледной трепонемы, именно поэтому появление полосы на этом белке может обусловить ложноположительный результат обследования.

Тест иммуноблот

Состояния, при каких показано обследование методом иммуноблота

  • Наличие клинических признаков заболевания;
  • Положительные или сомнительные результаты предыдущих серологических исследований, особенно при следующих заболеваниях и состояниях: туберкулез, онкологический процесс, болезнь Лайма, сахарный диабет, вакцинация, наркозависимость, хронический алкоголизм, гиперлипидемия, беременность, возраст старше 70 лет и т.д.
  • Подозрение на первичный и вторичный сифилис при отрицательных ответах других тестирований;
  • Подозрение на сифилис на фоне приема антибиотиков, других антисептических препаратов;
  • Подозрение на скрытый сифилис;
  • Все язвенные поражения органов половой системы;
  • Половой контакт с больным сифилисом в анамнезе;
  • Наличие сопутствующего венерического заболевания;
  • Врожденная форма сифилиса;
  • Нейросифилис;
  • Сифилис внутреннего уха;
  • ВИЧ-инфекция;
  • Сопутствующие аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, узелковый периартериит, системная склеродермия, сахарный диабет и т.д.)

Сроки определения противотрепонемных антител

Специфические антитела против возбудителя сифилитической инфекции (Ig M) появляются в организме спустя 7-14 дней после инфицирования с максимальным уровнем на 6-9 неделе. Исчезают через 12-18 месяцев у лиц, не получавших антибактериальную терапию, через 3-6 месяцев – после проведения полноценного курса лечения. Их можно обнаружить у пациентов, как с первичным, так и с вторичным сифилисом, что позволяет уточнить старая это инфекция или свежая. Однако при стертом течении заболевания IgM не идентифицируются.

Противотрепонемные антитела класса Ig G появляются позже, примерно к концу первого месяца инфекционного заболевания и обычно сохраняются на протяжении долгого времени или всей жизни. Их концентрация постоянно растет и максимально фиксируется через 1-2 года после первой встречи организма с бледной трепонемой.

К моменту появления первых признаков болезни в крови больного можно выявить оба класса антител.

Появление IgM снова в крови больного свидетельствуют о повторном заражении сифилисом, его рецидиве или неэффективной лечебной тактике.

Подготовка к правильной сдаче анализа

Определенной подготовки к проведению теста не требуется. Среди общих рекомендаций – взятие образца крови не ранее чем через 24 часа после употребления алкоголя, воздержание от курения, прием пищи за 4 и более часов.